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本制品是基于Histan III Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与Histan II Reverse Transcriptase相比，Histan III Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

该预混液包含5×gDNA digester Mix和4×Histan III SuperMix plus。5×gDNA digester Mix可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。4×Histan III SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，Histan III Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和RNase-free H2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择Hiper UNICON qPCR SYBR Green Master Mix，Hiper qPCR SYBR Green Master Mix或Hiper qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

• 5×gDNA digester Mix和4×Histan III SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取；
  
• 如果加入RNA模板体积较大(如超过2μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
  
• 可以不经过基因组去除步骤，直接用4×Histan III SuperMix plus进行逆转录，这样所得到的结果会与使用Histan III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No.SY0831)效果一致。但是请勿将gDNA digester与SY0831中的Histan III SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；
  
• 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
  
• 本制品仅作科研用途！

• 残留基因组DNA去除
  在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。
  

  成分		用量
  RNase-free H2O		To 15μL
  5×gDNA digester Mix		3μL
  模板	Total RNA	10pg～5μg*
  	mRNA	10pg～500ng*

  
  注^*：20μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1μg。如果目的基因的表达丰度低，最多投入5μg Total RNA，否则RNA投入量过高，可能会超过后续定量PCR的线性范围。
  
• 逆转录反应体系配制
  在第1步的反应管中直接加入4×Histan III SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
  

  成分	用量
  第1步的反应液	15μL
  4×Histan III SuperMix plus	5μL

• 逆转录标准程序
  
  • 逆转录标准程序设置
    

    温度	时间
    25℃	5min
    55℃	15min
    85℃	5min

    注：逆转录温度：推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃。
  • 逆转录快速程序设置
    

    温度	时间
    55℃	15min
    85℃	5sec

    注：逆转录快速程序适用于中低GC含量（≤55%）或者简单模板。
• 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。